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详细介绍酶标仪酶免分析七大步骤
更新时间:2016-04-27   点击次数:1925次
酶标仪是酶联免疫吸附试验的仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。 测定一般要求测试液的终体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
1 、将标准品和样品对应的微孔编号,每个标准品和样品做双孔平行,并记录标准品和样品的位置。
2 、在标准品孔中加入 50µl 各标准品溶液,酶标仪在各样品孔中加入 50µl 样品溶液。
3 、在所有孔中加入 50µl 的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡混匀, 25 ℃环境中避光反应 30 分钟。
4 、小心揭开盖板膜,甩干孔中液体,用稀释好的洗涤液( 250μl/ 孔)充分洗涤微孔板 3 次,在吸水纸上拍干(拍干后未清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
5 、酶标仪在所有孔中加入 100µl 的酶标二抗,酶标仪用盖板膜封板,轻轻振荡混匀, 25 ℃环境中避光反应 30 分钟。取出酶标板,按步骤 4 洗板 5 次。
6 、洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入 50µl 底物液 A ,再加 50µl 底物液 B ,轻微晃动反应板使之*混匀, 25 ℃环境避光显色 15 分钟 ( 在颜色浅的情况下可适当延长反应时间,但总显色时间不要超过 30 分钟 ) 。
7 、每孔中加入 50µl 终止液,轻轻晃动使之*混匀,在 450nm (建议使用双波长 450/630nm )下检测吸光度,结果在 5 分钟内读取。

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